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基因合成需要客戶提供質(zhì)粒。
可以,就是基因合成,只需要客戶提供抗體的重鏈和輕鏈序列就可以。
我們目前的抗體表達載體是鼠源和人源,可以合成goat,chicken或者sheep的全長抗體序列裝到pTT5里進行表達。
大概需要1-2ug即可。
有慢病毒載體:pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP和pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro.可以問下客戶的研究目的.?如果客戶做蛋白的建議還是不要建議這兩個載體。
轉染細胞一般用flag檢測表達情況。如果有標簽可以做WB來鑒定是否表達。用熒光載體或QPCR檢測是否轉染細胞。若質(zhì)粒沒有加熒光可以用QPCR檢測。
1、引物 更換引物嘗試,設置陽性對照(其他同載體的質(zhì)粒)和陰性對照(空載體)看是否引物問題。 2、PCR擴增體系 一般問題不大,可以看下退火溫度等信息。 3、抗性是否加錯,抗性濃度是否正常。